新的免疫熒光方法-ibidi通道載玻片
【ibidi--focus on cells】通道載玻片--新的免疫熒光方法
細(xì)胞的免疫熒光實驗是一個基礎(chǔ)的細(xì)胞實驗，傳統(tǒng)的方法是在培養(yǎng)板中放入預(yù)先處理好的蓋玻片，待細(xì)胞貼壁后，使用鑷子將蓋玻片拿出再開始進行固定，染色等系列工作。
現(xiàn)在分享一種簡便的免疫熒光方法，無需爬片，培養(yǎng)-操作-鏡檢，在一個培養(yǎng)皿/載玻片上完成所有工作！一氣呵成！
使用如圖的培養(yǎng)皿和載玻片，免疫熒光步驟將簡化為：
1.直接細(xì)胞培養(yǎng)
2.沖洗玻片/培養(yǎng)皿
3.固定細(xì)胞
4.沖洗玻片/培養(yǎng)皿
5.染色
6.沖洗玻片/培養(yǎng)皿
7.凍存液處理細(xì)胞
8.直接鏡檢觀察
免去了指甲油封片的傳統(tǒng)免疫熒光方法中的冗長步驟：
1.無需對蓋玻片和載玻片消毒滅菌
2.無需對蓋玻片進行包被
3.無需等細(xì)胞爬片
4.無需指甲油封片
之所能如此簡便完成免疫熒光實驗，是因為這些ibidi培養(yǎng)皿和載玻片的底部為特殊處理的材質(zhì)，絕大多數(shù)細(xì)胞可以直接貼壁生長，而不需要另外包被。同時，這些耗材的底部薄如蓋玻片，可以直接使用倒置顯微鏡進行觀察，得到高質(zhì)量的成像，適用于顯微鏡比如共聚焦顯微鏡。
成像效果：
下面再分享一種免疫熒光方法，不僅更加簡化實驗步驟，而且可以節(jié)約試劑和細(xì)胞，同時還能得到更理想的成像效果。
如圖的ibidi通道載玻片，簡單快速完成免疫熒光實驗。
步驟：培養(yǎng)-固定-染色-鏡檢，只需在這個載玻片上進行4個步驟，免疫熒光實驗輕松完成~
優(yōu)點總結(jié)：
1、節(jié)約細(xì)胞和試劑
ibidi通道載玻片里的通道只有400μm高，以μ-slide VI為例，通道的容積只有30μl，而普通8well的腔式載玻片一個孔的容積有300μl。這意味著通道需要的試劑和細(xì)胞量僅需約十分之一！對于非常珍貴的細(xì)胞和試劑來說，這可是非常重要的。
2、成像效果好
使用通道載玻片時，能在相差顯微鏡下獲得更好的成像效果。因為通道上下都是平坦的，不會因為凹液面的折射現(xiàn)象影響到相差顯微鏡成像。而well式的開放小室的相差成像會受到培養(yǎng)皿蓋和液面的折射現(xiàn)象影響。
3、細(xì)胞分布均勻
在通道載玻片中，由于沒有培養(yǎng)皿壁的影響，鋪入細(xì)胞后，不需要平時的混勻操作，細(xì)胞的分布就非常均勻了。而使用開放小室，有可能在鋪細(xì)胞混勻后，細(xì)胞還是會聚集在小室的邊緣或中心上。如下圖所示。a 是明場相差成像，b為熒光成像。
免疫熒光本身就是個十分基礎(chǔ)的實驗，如今的科技更是便利了實驗，實驗也發(fā)展了科技。
以上方法分享給有需要的，奔跑在科研前沿的童鞋們~更快更省地做好免疫熒光噢！
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