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ibidi Chemotaxis 2D and 3D細胞趨化載玻片

　　可視2D/3D細胞趨化實驗流程：

　　開始實驗前

　　必要設備

　　基本要求：

　　倒置相差顯微鏡（推薦5倍或10倍物鏡）

　　用于延時圖像采集的相機

　　Stage Top培養(yǎng)箱（大多數(shù)哺乳動物細胞類型需要）

　　推薦擴展：

　　用于并行圖像采集的電動載物臺

　　自動對焦

　　1.樣品制備

　　步驟

　　使用ibidi µ-Slide Chemotaxis細胞趨化載玻片，可以進行具有定義的趨化梯度的可重現(xiàn)的趨化性測定。

　　首先，細胞接種，這可以在2D或3D環(huán)境中完成。孵育和細胞附著后，根據(jù)確定的加載方案，用趨化劑填充滿每個腔室的兩個儲液池。

　　ibidi 的解決方案

　　µ-Slide Chemotaxis 包含3個獨立的腔室，用于使用緩慢或快速遷移的細胞進行平行趨化性測定。

　　它允許在可重現(xiàn)的環(huán)境中創(chuàng)建精確定義的、穩(wěn)定的趨化梯度。

　　2.活細胞成像

　　步驟

　　生理條件下的活細胞成像能夠詳細記錄細胞隨時間的遷移，這是正確分析趨化性測定所必需的過程。

　　成像周期的持續(xù)時間取決于細胞類型（例如，快速遷移的白細胞或緩慢遷移的腫瘤細胞或成纖維細胞）和環(huán)境條件（例如，趨化劑的類型和濃度）。用于緩慢遷移細胞的典型視頻顯微鏡設置包括在24小時內(nèi)每 2.5-10分鐘拍攝一張照片。

　　由于每個實驗最佳地包含來自20-40個單細胞的跟蹤數(shù)據(jù)，因此應使用低倍顯微鏡物鏡，例如4倍或10倍。

　　MDA-MB-231 人乳腺癌細胞在膠原凝膠中遷移的延時顯微成像。在 µ-Slide Chemotaxis 中以 EGF 作為趨化劑觀察細胞 24小時。生理條件由ibidi加熱和氣體培養(yǎng)系統(tǒng)維持。

　　ibidi的解決方案

　　ibidi Stage Top Incubators ibidi加熱和氣體培養(yǎng)系統(tǒng)提供顯微鏡下的生理環(huán)境，可在短期和長期趨化性測定期間實現(xiàn)活細胞成像。

　　3.細胞追蹤

　　步驟

　　通常趨化性測定的活細胞顯微鏡檢查會創(chuàng)建時間圖像堆棧，其中每個圖像顯示特定時間點的確切細胞位置。

　　為了量化它們的運動，通過確定它們在圖像堆棧的每一幀上的位置來跟蹤單個細胞。跟蹤可以手動完成，也可以使用特殊軟件自動完成。之后，每個跟蹤單元格 (x, y)的位置值可用于每個時間點(t)并可以進一步分析。

　　使用ImageJ手動跟蹤插件跟蹤后的細胞跟蹤可視化。

跟蹤后ImageJ手動跟蹤插件的輸出；具有每個時間點（t）的每個被跟蹤單元（x，y）的位置值的數(shù)據(jù)表。

　　ibidi的解決方案

　　自動跟蹤和數(shù)據(jù)分析：

　　MetaVi Labs的Chemotaxis FastTrack AI Image Analysis圖像分析是一種基于AI的自動圖像分析解決方案，用于趨化性測定?；诰W(wǎng)絡的軟件將快速而強大的細胞跟蹤與人工智能 (AI) 相結合，無需標記即可進行客觀且可重復的分析。只需將您的數(shù)據(jù)上傳到您的FastTrack AI帳戶，即可開始分析工作。在1到2小時內(nèi)，您將收到一份詳細的報告供下載和進一步評估。

　　手動跟蹤：

　　ImageJ手動跟蹤插件有助于在趨化性測定中手動跟蹤細胞遷移。

　　4.數(shù)據(jù)分析

　　趨化性測定數(shù)據(jù)分析步驟：

　　* 數(shù)據(jù)繪圖

　　* 定量與統(tǒng)計分析

　　* 數(shù)據(jù)解釋

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